生物實驗室常見的消毒與滅菌
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(一)明確消毒的主要對象 應具體分析引起感染的途徑、涉及的媒介物及病原微生物的種類，有針對性地使用消毒劑。
(二)采取適當的消毒方法 根據消毒對象選擇簡便、有效、不損壞物品、來源豐富、價格適中的消毒方法。
醫院診療器械按污染后可造成的危害程度和在人體接觸部位不同分為三類：
1.高度危險的器材 穿過皮膚、粘膜而進入無菌的組織或器官內部，或與破損的皮膚粘膜密切接觸的器材，如手術器械、注射器、心臟起搏器等。必須選用高效消毒法(滅菌)。
2.中度危險的器材僅與皮膚、粘膜密切接觸，而不進入無菌組織內，如內窺鏡、體溫計、氧氣管、呼吸機及所屬器械、麻醉器械等。應選用中效消毒法，殺滅除芽胞以外的各種微生物。
3.低度危險器材和物品 不進入人體組織，不接觸粘膜，僅直接或間接地與健康無損的皮膚接觸，如果沒有足夠數量的病原微生物污染，一般并無危害，如口罩、衣被、藥杯等，應選用低效消毒法或只作一般衛生處理。只要求去除一般細菌繁殖體和親脂病毒。
(三)控制影響消毒效果的因素 許多因素會影響消毒劑的作用，而且各種消毒劑對這些因素的敏感性差異很大。
1.微生物的種類 不同類型的病原微生物對消毒劑抵抗力不同，因此，進行消毒時必須區別對待。
(1)細菌繁殖體 易被消毒劑消滅，一般革藍氏陽性細菌對消毒劑較敏感，革藍氏陰性桿菌則常有較強的抵抗力。繁殖體對熱敏感，消毒方法以熱力消毒為主。
(2)細菌芽胞 芽胞對消毒因子耐力最強，殺滅細菌芽胞最可靠的方法是熱力滅菌，電離輻射和環氧乙烷熏蒸法。在化學消毒劑中，戊二醛、過氧乙酸能殺滅芽胞，但可靠性不如熱力滅菌法。
(3)病毒 對消毒因子的耐力因種類不同而有很大差異，親水病毒的耐力較親脂病毒強。
(4)真菌 對干燥、日光、紫外線以及多數化學藥物耐力較強，但不耐熱(60℃1小時殺滅)。
2.微生物的數量 污染的微生物數量越多需要消毒的時間就越長，劑量越大。
3.有機物的存在 ①有機物在微生物的表面形成保護層妨礙消毒劑與微生物的接觸或延遲消毒劑的作用，以致于微生物逐漸產生對藥物的適應性。②有機物和消毒劑作用，形成溶解度比原來更低或殺菌作用比原來更弱的化合物。③一部分消毒劑與有機物發生了作用，則對微生物的作用濃度降低。④有機物可中和一部分消毒劑。消毒劑中重金屬類、表面活化劑等受有機物影響較大，對戊二醛影響較小。
4.溫度 隨著溫度的升高，殺菌作用增強，但溫度的變化對各種消毒劑影響不同。如甲醛、戊二醛、環氧乙烷的濕度升高1倍時，殺菌效果可增加10倍。而酚類和酒精受溫度影響小。
5.PH值 從兩方面影響殺菌作用。①對消毒劑的作用：改變其溶解度和分子結構。②pH過高或過低對微生物的生長均有影響。在酸性條件下，細菌表面負電荷減少，陰離子型消毒劑殺菌效果好。在堿性條件下，細菌表面負電荷增多，有利于陽離子型消毒劑發揮作用。
6.處理劑量與監測 保證消毒、滅菌處理的劑量，加強效果監測，防止再污染。
高壓蒸汽滅菌法的注意事項
第一，無菌包不宜過大(小于50cm×30cm×30cm)，不宜過緊，各包裹間要有間隙，使蒸汽能對流易滲透到包裹中央。消毒前，打開貯槽或盒的通氣孔，有利于蒸汽流通。而且排氣時使蒸汽能迅速排出，以保持物品干燥。消毒滅菌完畢，關閉貯槽或盒的通氣孔，以保持物品的無菌狀態。
第二，布類物品應放在金屬類物品上，否則蒸汽遇冷凝聚成水珠，使包布受潮。阻礙蒸汽進入包裹中央，嚴重影響滅菌效果。
第三，定期檢查滅菌效果。經高壓蒸汽滅菌的無菌包、無菌容器有效期以1周為宜。
高壓蒸汽滅菌效果的監測：有以下三種方法:
第一種是工藝監測，又稱程序監測。根據安裝在滅菌器上的量器(壓力表、溫度表、計時表)、圖表、指示針、報警器等，指示滅菌設備工作正常與否。此法能迅速指出滅菌器的故障，但不能確定待滅菌物品是否達到滅菌要求。此法作為常規監測方法，每次滅菌均應進行.。
第二種是化學指示監測。利用化學指示劑在一定溫度與作用時間條件下受熱變色或變形的特點，以判斷是否達到滅菌所需參數。常用的有：
自制測溫管：將某些化學藥物的晶體密封于小玻璃管內(長2cm,內徑1～2mm)制成。常用試劑有苯甲酸(熔點121-123℃)等。滅菌時，當濕度上升至藥物的熔點，管內的晶體即熔化，事后，雖冷卻再凝固，其外形仍可與未熔化的晶體相區別，此法只能指示溫度，不能指示熱持續時間是否已達標，因此是最低標準。主要用于各物品包裝的中心情況的監測。
M壓力滅菌指示膠帶：此膠帶上印有斜形白色指示線條圖案，是一種貼在待滅菌的無菌包外的特制變色膠紙。其粘貼面可牢固地封閉敷料包、金屬盒或玻璃物品，在121℃經20分鐘，130℃經4分鐘后，膠帶100%變色(條紋圖案即顯現黑色斜條)。3M膠帶既可用于物品包裝表面情況的監測，又可用于對包裝中心情況的監測，還可以代替別針，夾子或帶子使用。
第三種是生物指示劑監測。利用耐熱的非致病性細菌芽胞作指示菌，以測定熱力滅菌的效果。菌種用嗜熱脂肪桿菌，本菌芽胞對熱的抗力較強，其熱死亡時間與病原微生物中抗力最強的肉毒桿菌芽胞相似。生物指示劑有芽胞懸液、芽胞菌片以及菌片與培養基混裝的指示管。檢測時應使用標準試驗包，每個包中心部位置生物指示劑2個，放在滅菌柜室的5個點，即上、中層的中央各一個點，下層的前、中、后各一個點。滅菌后，取出生物指示劑，接種于溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養基中，置55-60℃溫箱中培養48小時至7天，觀察最終結果。若培養后顏色未變，澄清透明，說明芽胞已被殺滅。達到了滅菌要求。若變為黃色混濁，說芽胞未被殺滅，滅菌失敗。
